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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HXG557 |
| 用途 | 僅限科研 |
| 包裝規格 | 50T/盒 |
| 純度 | 詳詢客服% |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 否 |
牛結節性皮膚病（LSDV）試劑盒（熒光-PCR法）為滬崢生物主要產品，滬崢生物堅守品質、銳意進取，滿足于每一位老師的實驗要求，廠家供貨，品質保證，價格優惠,歡迎來電咨詢！
規格：50T/盒
本試劑盒用牛結節性皮膚病（LSDV）特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對牛結節性皮膚病（LSDV）進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。【儲存條件及有效期】
-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】
ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】
牛結節性皮膚病（LSDV）試劑盒（熒光-PCR法）樣品處理（樣本處理區）
1. 樣本前處理
組織樣品：每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中
1) DNA 的提取也可以采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
|
試劑 |
APP 反應液 |
酶液 |
|
用量（樣本數為 N） |
20μL |
1μL |
將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21uL/管。
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3 推薦循環參數設置：
|
步驟 |
循環數 |
溫度 |
時間 |
收集熒光信號 |
|
1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
|
2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
|
55℃ |
30sec |
是 |
5.1 結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；
可疑：檢測通道 35值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35值≤38， 且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
陰性質控品：Ct 值>38 或無 Ct 值；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
? 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
? 陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
? 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
? 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
? 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定 量檢測不準確的結果；
? 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
? 所有操作嚴格按照說明書進行；
? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；
? 反應液應避光保存；
? 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；
? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通 則》進行處理。
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